(Flow cytometry, FCM) je celični analizator, ki meri intenzivnost fluorescence obarvanih celičnih markerjev. Gre za visokotehnološko tehnologijo, razvito na podlagi analize in sortiranja posameznih celic. Hitro lahko izmeri in razvrsti velikost, notranjo strukturo, DNK, RNK, proteine, antigene in druge fizikalne ali kemijske lastnosti celic ter lahko temelji na zbirki teh klasifikacij.
Pretočni citometer je v glavnem sestavljen iz naslednjih petih delov:
1 Pretočna komora in fluidni sistem
2 Laserski vir svetlobe in sistem za oblikovanje žarka
3 Optični sistem
4 Elektronika, sistem za shranjevanje, prikaz in analizo
5 Sistem za razvrščanje celic
Med njimi je lasersko vzbujanje v viru laserske svetlobe in sistemu za oblikovanje žarka glavna meritev fluorescenčnih signalov v pretočni citometriji. Intenzivnost vzbujalne svetlobe in čas osvetlitve sta povezana z intenzivnostjo fluorescenčnega signala. Laser je koherenten svetlobni vir, ki lahko zagotovi svetlobo z eno valovno dolžino, visoko intenzivnostjo in visoko stabilnostjo. Je idealen vir vzbujalne svetlobe za izpolnjevanje teh zahtev.
Med laserskim virom in pretočno komoro sta dve cilindrični leči. Te leče fokusirajo laserski žarek s krožnim prečnim prerezom, ki ga oddaja laserski vir, v eliptični žarek z manjšim prečnim prerezom (22 μm × 66 μm). Laserska energija v tem eliptičnem žarku je porazdeljena v skladu z normalno porazdelitvijo, kar zagotavlja dosledno intenzivnost osvetlitve za celice, ki gredo skozi območje zaznavanja laserja. Po drugi strani je optični sistem sestavljen iz več nizov leč, lukenj in filtrov, ki jih lahko grobo razdelimo v dve skupini: pred in dol od pretočne komore.
Optični sistem pred pretočno komoro je sestavljen iz leče in luknjice. Glavna funkcija leče in luknjice (običajno dveh leč in luknjice) je fokusiranje laserskega žarka s krožnim prerezom, ki ga oddaja laserski vir, v elipsasti žarek z manjšim prerezom. To porazdeli lasersko energijo v skladu z normalno porazdelitvijo, kar zagotavlja enakomerno intenzivnost osvetlitve celic v območju zaznavanja laserja in zmanjša motnje zaradi razpršene svetlobe.
Obstajajo tri glavne vrste filtrov:
1: Dolgoprepustni filter (LPF) – prepušča samo svetlobo z valovno dolžino, ki je višja od določene vrednosti.
2: Kratkoprepustni filter (SPF) – prepušča samo svetlobo z valovno dolžino pod določeno vrednostjo.
3: Pasovni filter (BPF) – prepušča samo svetlobo v določenem območju valovnih dolžin.
Različne kombinacije filtrov lahko usmerijo fluorescenčne signale različnih valovnih dolžin na posamezne fotopomnoževalne cevi (PMT). Na primer, filtra za zaznavanje zelene fluorescence (FITC) pred PMT sta LPF550 in BPF525. Filtra, ki se uporabljata za zaznavanje oranžno-rdeče fluorescence (PE) pred PMT, sta LPF600 in BPF575. Filtra za zaznavanje rdeče fluorescence (CY5) pred PMT sta LPF650 in BPF675.
Pretočna citometrija se uporablja predvsem za razvrščanje celic. Z napredkom računalniške tehnologije, razvojem imunologije in izumom tehnologije monoklonskih protiteles postajajo vse bolj razširjene njihove aplikacije v biologiji, medicini, farmaciji in na drugih področjih. Te aplikacije vključujejo analizo celične dinamike, celično apoptozo, tipizacijo celic, diagnozo tumorjev, analizo učinkovitosti zdravil itd.
Čas objave: 21. septembra 2023
