(Pretočna citometrija, FCM) je celični analizator, ki meri intenzivnost fluorescence obarvanih celičnih markerjev. Gre za visokotehnološko tehnologijo, ki je bila razvita na podlagi analize in razvrščanja posameznih celic. Hitro lahko meri in razvrsti velikost, notranjo strukturo, DNA, RNA, beljakovine, antigene in druge fizikalne ali kemijske lastnosti celic ter lahko temelji na zbiranju teh klasifikacij.
Pretočni citometer je v glavnem sestavljen iz naslednjih petih delov:
1 pretočna komora in sistem fluidic
2 laserski vir svetlobe in sistem za oblikovanje žarka
3 optični sistem
4 Elektronika, shranjevanje, prikaz in sistem analize
5 sistem za razvrščanje celic
Med njimi je lasersko vzbujanje v laserskem svetlobnem viru in sistemu oblikovanja žarka glavna meritev fluorescenčnih signalov v pretočni citometriji. Intenzivnost vzbujevalne svetlobe in čas osvetlitve sta povezana z intenzivnostjo fluorescenčnega signala. Laser je skladen svetlobni vir, ki lahko zagotavlja eno valovno dolžino, visoko intenzivnost in osvetlitev z visoko stabilnostjo. Za izpolnjevanje teh zahtev je idealen vir svetlobe vzbujanja.
Med laserskim virom in pretočno komoro sta dve valjasti leči. Te leče osredotočajo na laserski žarek s krožnim prerezom, ki ga iz laserskega vira oddaja v eliptični žarek z manjšim prerezom (22 μm × 66 μm). Laserska energija znotraj tega eliptičnega žarka se porazdeli v skladu z normalno porazdelitvijo, kar zagotavlja konstantno intenzivnost osvetlitve za celice, ki gredo skozi območje zaznavanja laserja. Po drugi strani je optični sistem sestavljen iz več sklopov leč, luknjic in filtrov, ki jih je mogoče grobo razdeliti v dve skupini: navzgor in navzdol od pretočne komore.
Optični sistem pred pretočno komoro je sestavljen iz leče in luknje. Glavna funkcija leče in luknje (običajno dve leči in luknja) je, da laserski žarek osredotočimo s krožnim prerezom, ki ga laserski vir oddaja v eliptični žarek z manjšim prerezom. To porazdeli lasersko energijo v skladu z normalno porazdelitvijo, tako da zagotavlja dosledno intenzivnost osvetlitve za celice na območju laserskega zaznavanja in zmanjšanje motenj iz potepuške svetlobe.
Obstajajo tri glavne vrste filtrov:
1: Filter z dolgim prehodom (LPF) - omogoča le svetlobo z valovnimi dolžinami, višjo od določene vrednosti.
2: Filter s kratkim prehodom (SPF) - omogoča le svetlobo z valovnimi dolžinami pod določeno vrednostjo.
3: Filter BandPass (BPF) - omogoča samo svetlobo v določenem območju valovne dolžine.
Različne kombinacije filtrov lahko usmerjajo fluorescenčne signale pri različnih valovnih dolžinah na posamezne cevi za fotomultiplikator (PMT). Na primer, filtri za odkrivanje zelene fluorescence (FITC) pred PMT so LPF550 in BPF525. Filtri, ki se uporabljajo za odkrivanje oranžno-rdeče fluorescence (PE) pred PMT, sta LPF600 in BPF575. Filtri za odkrivanje rdeče fluorescence (CY5) pred PMT sta LPF650 in BPF675.
Pretočna citometrija se uporablja predvsem za razvrščanje celic. Z napredovanjem računalniške tehnologije, razvojem imunologije in izumom monoklonske tehnologije protiteles, njene uporabe v biologiji, medicini, farmaciji in drugih področjih postajajo vse bolj razširjene. Te aplikacije vključujejo analizo dinamike celice, celično apoptozo, tipkanje celic, diagnozo tumorja, analizo učinkovitosti zdravil itd.
Čas objave: SEP-21-2023
