(Pretočna citometrija, FCM) je celični analizator, ki meri intenzivnost fluorescence obarvanih celičnih markerjev. Gre za visokotehnološko tehnologijo, razvito na podlagi analize in razvrščanja posameznih celic. Hitro lahko izmeri in razvrsti velikost, notranjo strukturo, DNK, RNK, beljakovine, antigene in druge fizikalne ali kemijske lastnosti celic ter temelji na zbiranju teh klasifikacij.
Pretočni citometer je sestavljen predvsem iz naslednjih petih delov:
1 Pretočna komora in fluidni sistem
2 Laserski vir svetlobe in sistem za oblikovanje žarka
3 Optični sistem
4 Elektronika, sistem za shranjevanje, prikaz in analizo
5 Sistem za sortiranje celic
Med njimi je lasersko vzbujanje v laserskem svetlobnem viru in sistemu za oblikovanje žarka glavna meritev fluorescenčnih signalov v pretočni citometriji. Intenzivnost vzbujevalne svetlobe in čas osvetlitve sta povezana z intenzivnostjo fluorescenčnega signala. Laser je koherenten svetlobni vir, ki lahko zagotavlja osvetlitev z eno valovno dolžino, visoko intenzivnostjo in visoko stabilnostjo. Je idealen vzbujevalni svetlobni vir, ki izpolnjuje te zahteve.
Med laserskim virom in pretočno komoro sta dve valjasti leči. Ti leči fokusirata laserski žarek s krožnim prečnim prerezom, ki ga oddaja laserski vir, v eliptični žarek z manjšim prečnim prerezom (22 μm × 66 μm). Laserska energija znotraj tega eliptičnega žarka se porazdeli po normalni porazdelitvi, kar zagotavlja enakomerno intenzivnost osvetlitve celic, ki prehajajo skozi območje laserskega zaznavanja. Po drugi strani pa optični sistem sestavlja več sklopov leč, luknjic in filtrov, ki jih lahko v grobem razdelimo v dve skupini: pred in za pretočno komoro.
Optični sistem pred pretočno komoro je sestavljen iz leče in luknjice. Glavna funkcija leče in luknjice (običajno dveh leč in luknjice) je fokusiranje laserskega žarka s krožnim prečnim prerezom, ki ga oddaja laserski vir, v eliptični žarek z manjšim prečnim prerezom. To porazdeli lasersko energijo po normalni porazdelitvi, kar zagotavlja enakomerno intenzivnost osvetlitve celic po celotnem območju laserskega zaznavanja in zmanjšuje motnje zaradi razpršene svetlobe.
Obstajajo tri glavne vrste filtrov:
1: Dolgoprepustni filter (LPF) - prepušča le svetlobo z valovnimi dolžinami, višjimi od določene vrednosti.
2: Kratkopasovni filter (SPF) - prepušča le svetlobo z valovnimi dolžinami pod določeno vrednostjo.
3: Pasovni filter (BPF) - prepušča le svetlobo v določenem območju valovnih dolžin.
Različne kombinacije filtrov lahko usmerijo fluorescenčne signale pri različnih valovnih dolžinah na posamezne fotopomnoževalne cevi (PMT). Na primer, filtra za zaznavanje zelene fluorescence (FITC) pred PMT sta LPF550 in BPF525. Filtri, ki se uporabljajo za zaznavanje oranžno-rdeče fluorescence (PE) pred PMT, so LPF600 in BPF575. Filtri za zaznavanje rdeče fluorescence (CY5) pred PMT sta LPF650 in BPF675.
Pretočna citometrija se uporablja predvsem za sortiranje celic. Z napredkom računalniške tehnologije, razvojem imunologije in izumom tehnologije monoklonskih protiteles postaja njena uporaba v biologiji, medicini, farmaciji in drugih področjih vse bolj razširjena. Te uporabe vključujejo analizo celične dinamike, celično apoptozo, tipizacijo celic, diagnosticiranje tumorjev, analizo učinkovitosti zdravil itd.
Čas objave: 21. september 2023
